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肺炎支原体的培养方法

肺炎支原体的培养方法

肺炎支原体(M.Pneumonia)是人类支原体肺炎的病原体。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主,有时并发支气管肺炎,称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染,潜伏期2~3周,发病率以青少年最高。临床症状较轻,甚至根本无症状,若有也只是头痛、咽痛、发热、咳嗽等一般的呼吸道症状,但也有个别死亡报道。一年四季均可发生,但多在秋冬时节。

症状:

支原体肺炎突出表现为阵发性刺激性咳嗽。肺炎支原体感染人体后,经过2~3周的潜伏期,继而出现临床表现,约1/3的病例也可无症状。它起病缓慢,发病初期有咽痛、头痛、发热、乏力、肌肉酸痛、食欲减退、恶心、呕吐等症状。发热一般为中等热度,2~3天后出现明显的呼吸道症状,突出表现为阵发性刺激性咳嗽,以夜间为重,咳少量黏痰或黏液脓性痰,有时痰中带血,也可有呼吸困难、胸痛。发热可持续2~3周,体温正常后仍可遗有咳嗽。

支原体肺炎患者虽然自感症状较重,但胸部体检一般无明显异常体征。鼻部轻度鼻塞、流涕,咽中度充血。耳鼓膜常有充血,约15%有鼓膜炎。颈淋巴结可肿大。约10%~15%病例发生少量胸腔积液。除呼吸系统的表现外,支原体肺炎可伴发多系统、多器官损害。皮肤损害可表现为斑丘疹、结节性红斑、水疱疹等。胃肠道系统可见呕吐、腹泻和肝功损害。血液系统损害较常见溶血性贫血。中枢神经系统损害可见多发性神经根炎、脑膜脑炎及小脑损伤等。心血管系统病变偶有心肌炎及心包炎。

支原体肺炎患者胸部X线检查变化很大,病变可很轻微,也可很广泛。体征轻微而胸片阴影显著,是本病特征之一。血常规检查白细胞高低不一,大多正常,有时偏高。支原体肺炎的临床表现和胸部X线检查并不具特征性,单凭临床表现和胸部X线检查无法做出诊断。若要明确诊断,需要进行病原体的检测。目前,国内支原体肺炎的诊断主要依靠血清学检测。

分离培养方法:

1、支原体固体培养基接种法

转动拭子将标本液体尽量挤出,用无菌滴管吸1-2滴接种在平皿上盖好,用L棒涂抹或倾斜转动平皿使标本均匀分布,置37°C孵育。

2、支原体半固体培养基接种法

混种法:在制备半固体培养基时,培养基加热溶化,温度降至50°C时,添加动物血清、酵母浸液及青霉素后混匀,待冷却至37-40°C时,用无菌滴管吸取标本0.5-1ml加入培养基中,充分混匀,凝固后置37°C孵育。

3、穿刺接种法:方法同细菌接种法。

结果观察

绝大多数支原体为兼性厌氧,少数在含10% CO2和相对湿度80-90%的大气环境中生长良好。支原体生长缓慢,多数于3-4d长出菌落,少数于1-2w方长出典型菌落,在平皿固体培养基上生长的菌落呈"油煎蛋"状,边缘不整齐。

常用培养基及配方:

一、心汤复合培养基配方

牛心汤1000ml

蛋白胨10g

氯化钠5ml

酵母提取液10ml

无菌马血清200ml

1.25%醋酸铊溶液20ml

青霉素200IU/ml。

二、糖酵解培养基(肺炎支原体培养基)

1、配方一:

基础培养基 70ml

马(或牛血清) 20ml

25%酵母浸液 10ml

0.4%酚红 0.5ml

1%醋酸铊 2.5ml

青霉素10000IU/ml 5.0ml

调pH 7.8

2、配方二:

PPLO 21g(商品化买)

酵母粉 6g(OXIDE)

马血清 200ml(可用小牛血清代替)

L-半胱氨酸 0.3g

葡萄糖 10g

1%酚红 4ml

AMP 若干(0.1-0.2g,醋酸铊有毒性,可不加)

调pH 7.5-7.6

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